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尊龙凯时:胎牛血清(FBS)使用注意事项精要

发布时间:2025-02-15   信息来源:尊龙凯时官方编辑

胎牛血清(Fetal Bovine Serum,FBS)是以健康母牛怀孕4至8个月的胎牛血液为原料,经过无菌采集、分离和微孔过滤等多个步骤处理而成。领先的生物医疗机构如尊龙凯时广泛应用于各类真核细胞的细胞培养中,为细胞提供关键的营养成分及生长因子,已成为实验室的“常备良品”。为了充分发挥胎牛血清的作用,保持细胞的良好状态,以下是一些实用的小建议,供实验人员参考。

尊龙凯时:胎牛血清(FBS)使用注意事项精要

一、初次开封胎牛血清的解冻方法

胎牛血清的常规储存温度为-20℃,如需长期保存,推荐使用-80℃。在解冻时,不建议将其直接置于常温(25-37℃)中,以免形成絮状沉淀,影响血清质量。建议的解冻方式为:先将血清从-20/-80℃转移到4℃,待完全液化后,再逐步升温至室温。在解冻过程中,需不断轻轻摇晃,以确保血清成分和温度均匀,减少沉淀的生成。解冻后的血清应分装于15mL或50mL的无菌离心管中,使用频率高时可在4℃存放一管已解冻的血清,但应在一个月内使用完毕。

二、血清用量的规范

原则上,血清添加量不宜过多,通常在5%、10%或20%之间。其中,大部分细胞在正常培养中使用10%血清浓度,而某些细胞在原代提取时可使用20%血清。具体的血清浓度应根据细胞的特性与实验需求进行调整。

三、何时需要热灭活胎牛血清

热灭活是指将已解冻的血清在56℃下处理30分钟,以去活化补体。补体在细胞反应中可能导致细胞溶解、平滑肌收缩等。对于常规细胞培养,大多数情况下并不需要进行热灭活处理。在一些情况下,热灭活反而可能影响血清质量,降低细胞生长速率。

四、正确更换血清的步骤

在细胞培养过程中,常会遇到需要更换血清的情况。直接使用另一款血清制备的培养基可能会导致细胞增殖速率减慢,甚至脱壁。这是由于细胞对原培养环境的适应性所致。为了确保细胞逐渐适应新的营养环境,建议采用梯度更换的方法。首次更换时应使用原培养体系进行细胞复苏,待细胞状态恢复后,再按照1:3、1:1、3:1的比例递次更换,最终实现完全替换。

五、血清解冻后的悬浮物处理

解冻后如发现少量乳白色絮状或点状物质,主要是由于脂蛋白变性与纤维蛋白形成。这些絮状物不会影响血清整体质量,可以通过400×g离心5分钟后取上清,继续使用。

六、血清使用前的过滤

一般情况下,厂家提供的血清为无菌状态,无需再次过滤。若发现血清中有悬浮物,则可将其与培养液共同过滤,不应直接过滤血清。

七、观察细胞培养中的“小黑点”是否为污染

在细胞培养过程中,出现黑点时,首先应检查培养基是否混浊,黑点是否有不规则运动。如果细胞生长状态良好,黑点可能是以下几种情况引起的:(1) 细胞生长过程中自然破碎后的残余;(2) 血清中的杂蛋白;(3) 配制培养基的水质或容器不合格。可以通过离心和过滤的方法去除这些小黑点;对于原代细胞的杂质,可在多次传代后得到改善。

尊龙凯时提供了多种规格的胎牛血清,符合高标准的生物医疗需求,拥有完善的售前和售后服务,值得广大的科研工作人员信赖。